本文采用0.5mM棕榈酸（PA）处理MC3T3-E1细胞，模拟肥胖患者体内高脂环境，24h后，实验结果表明棕榈酸（PA）对MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化有明显抑制作用，且能促进其凋亡。本研究为肥胖所致骨质疏松的治疗提供了一个很好的细胞模型，具有一定的参考价值。

1）本文采用棕榈酸钠诱导的小鼠C2C12成肌细胞衰老模型，明确了最优浓度2.5μM下 ASP干预5天可以减缓衰老相关-β-半乳糖苷酶活性的增强、脂质的积累和P21、P16表达的增多，同时上调Klotho的表达。上述低浓度、长时间的细胞衰老诱导方案与常见的300-500μM、48-72小时损伤、炎症诱导方案不同，具有一定参考价值。 2）后期检测细胞活力（CCK-8或MTT）时，在高脂试剂和溶剂对照处理后，加入CCK-8或MTT前，需用PBS清洗2-3次，以去除溶剂对照和高脂试剂对吸光度的影响。

在众多国内外研究中，NAFLD细胞模型的构建以添加游离脂肪酸（FFAs）最为常见。Gomez-Lechon发现，应用油酸钠、棕榈酸钠含量比为2：1的游离脂肪酸混合物刺激肝细胞，引起的细胞毒性和凋亡作用非常微弱，适用于诱导肝脏细胞脂肪变性。本研究中，应用油酸钠：棕榈酸钠为2:1，总浓度为1mmol/L的高脂培养基刺激Hepa1-6细胞24小时，成功建立了肝脏脂肪变性的细胞模型。 需要说明的是，2：1的游离脂肪酸混合物刺激肝细胞只是普遍做法，而不一定是最优做法，实际情况可以根据细胞类型调整游离脂肪酸的浓度、比例和作用时间。

本研究选取出生1～3天的SD大鼠分离出原代心肌细胞后，与3T3-L1脂肪细胞构建NRCM/3T3-L1共培养体系，并加入400μmol/L棕榈酸（palmitic acid，PA）共培养2-3天，模拟肥胖时心肌细胞所处的内环境，成功诱导出心肌细胞脂质沉积和肥大表型。

确保高脂细胞添加剂在低温、常温状态下均不产生浑浊、沉淀、析出或絮状物质，确保试剂稳定和浓度准确，确保试剂使用过程中，不需要加热助溶，不需要额外其他操作，可以直接加入到完全培养基中。加入到培养基后，晃动培养板，不存在漂浮状物或浑浊物。

本研究使用400 μmol/L油酸钠、12 h，处理鸡胚原代肝细胞，发现能够成功诱导氧化应激模型。大部分肝细胞，比如HepG2细胞，我们一般推荐0.5 mmol/L油酸钠+0.25 mmol/L棕榈酸钠处理48-72 h，可以达到很好的效果。不同细胞具有一定差异，具体实验中可以根据自己的细胞类型以及所要建立的模型不同而恰当选择给药浓度和处理时间。

在众多国内外研究中，NAFLD细胞模型的构建以添加游离脂肪酸（FFAs）最为常见。Gomez-Lechon发现，应用油酸、棕榈酸含量比为2：1的游离脂肪酸混合物刺激肝细胞，引起的细胞毒性和凋亡作用非常微弱，适用于诱导肝脏细胞脂肪变性。本研究中，我们应用油酸钠：棕榈酸钠为2:1，总浓度为1mmol/L的高脂培养基刺激Hepa1-6细胞24小时，成功建立了肝脏脂肪变性的细胞模型。在此基础上发现，FFAs能够诱导Hepa1-6细胞中的miR-27b-3p表达增加，且miR-27b-3p过表达能加重FFAs诱导的脂质沉积和炎症反应。关于miR-27b在脂代谢中的作用，此前已有研究报道。Vickers等人发现，miR-27b是人类和小鼠肝脏中最强大的miRNA脂代谢调控中枢，能够调节多个关键脂质代谢基因的表达。Desrochers等人也发现，miR-27b能够下调肝脏中脂肪酶C的表达，减少丙型肝炎病毒感染期间TG的降解，从而促进肝细胞内脂质沉积。这与研究结果一致。miR-27b在肝脏炎症中的作用报道较少。有研究表明，miR-27b-3p参与慢性肝损伤中巨噬细胞活化的抑制。本研究中，miR-27b-3p对FFAs诱导的炎症反应起促进作用，这可能是由于FFAs刺激导致细胞对炎症的反应性发生改变。

文献中采用了经典诱导高脂细胞模型的方法，通过使用油酸钠与棕榈酸钠（OA/PA）进行联合给药36h成功诱导了高脂细胞模型，随后给药处理24h，以评估研究药物的药效。具了解，作者前期对OA/PA的诱导时间进行了摸索，分别在24h、36h以及48h三个时间下来诱导高脂细胞，最后认为36小时可以较好的诱导细胞脂滴蓄积。同时，由于细胞处理时间较长，作者在细胞生长至60%的汇合度就开始处理，不会导致后续细胞生长太过于密集，不便于油红O染色的观察。

作者采用不同浓度（0.2mM，0.4mM，0.6mM）的棕榈酸钠（Sodium palmitate）处理HepG2细胞以及原代肝细胞，维持24或48小时，可见棕榈酸钠浓度依赖性和时间依赖性地促进肝细胞糖基化以及CD36的表达（图1）。之后作者考虑到0.6mM的棕榈酸钠对HepG2细胞有一定的脂毒性，所以之后作者统一采用0.4mM的棕榈酸钠诱导HepG2细胞脂肪肝模型。

本研究使用200μM棕榈酸（PA）处理14天，可显著抑制PDLSCs的成骨分化潜能，为肥胖患者牙周组织再生治疗提供了一个体外研究模型。