本研究使用400 μmol/L油酸钠、12 h，处理鸡胚原代肝细胞，发现能够成功诱导氧化应激模型。大部分肝细胞，比如HepG2细胞，我们一般推荐0.5 mmol/L油酸钠+0.25 mmol/L棕榈酸钠处理48-72 h，可以达到很好的效果。不同细胞具有一定差异，具体实验中可以根据自己的细胞类型以及所要建立的模型不同而恰当选择给药浓度和处理时间。

在众多国内外研究中，NAFLD细胞模型的构建以添加游离脂肪酸（FFAs）最为常见。Gomez-Lechon发现，应用油酸、棕榈酸含量比为2：1的游离脂肪酸混合物刺激肝细胞，引起的细胞毒性和凋亡作用非常微弱，适用于诱导肝脏细胞脂肪变性。本研究中，我们应用油酸钠：棕榈酸钠为2:1，总浓度为1mmol/L的高脂培养基刺激Hepa1-6细胞24小时，成功建立了肝脏脂肪变性的细胞模型。在此基础上发现，FFAs能够诱导Hepa1-6细胞中的miR-27b-3p表达增加，且miR-27b-3p过表达能加重FFAs诱导的脂质沉积和炎症反应。关于miR-27b在脂代谢中的作用，此前已有研究报道。Vickers等人发现，miR-27b是人类和小鼠肝脏中最强大的miRNA脂代谢调控中枢，能够调节多个关键脂质代谢基因的表达。Desrochers等人也发现，miR-27b能够下调肝脏中脂肪酶C的表达，减少丙型肝炎病毒感染期间TG的降解，从而促进肝细胞内脂质沉积。这与研究结果一致。miR-27b在肝脏炎症中的作用报道较少。有研究表明，miR-27b-3p参与慢性肝损伤中巨噬细胞活化的抑制。本研究中，miR-27b-3p对FFAs诱导的炎症反应起促进作用，这可能是由于FFAs刺激导致细胞对炎症的反应性发生改变。

文献中采用了经典诱导高脂细胞模型的方法，通过使用油酸钠与棕榈酸钠（OA/PA）进行联合给药36h成功诱导了高脂细胞模型，随后给药处理24h，以评估研究药物的药效。具了解，作者前期对OA/PA的诱导时间进行了摸索，分别在24h、36h以及48h三个时间下来诱导高脂细胞，最后认为36小时可以较好的诱导细胞脂滴蓄积。同时，由于细胞处理时间较长，作者在细胞生长至60%的汇合度就开始处理，不会导致后续细胞生长太过于密集，不便于油红O染色的观察。

作者采用不同浓度（0.2mM，0.4mM，0.6mM）的棕榈酸钠（Sodium palmitate）处理HepG2细胞以及原代肝细胞，维持24或48小时，可见棕榈酸钠浓度依赖性和时间依赖性地促进肝细胞糖基化以及CD36的表达（图1）。之后作者考虑到0.6mM的棕榈酸钠对HepG2细胞有一定的脂毒性，所以之后作者统一采用0.4mM的棕榈酸钠诱导HepG2细胞脂肪肝模型。

本研究使用200μM棕榈酸（PA）处理14天，可显著抑制PDLSCs的成骨分化潜能，为肥胖患者牙周组织再生治疗提供了一个体外研究模型。

本研究使用棕榈酸/油酸联合诱导HepG2细胞的NAFLD模型。给予棕榈酸/油酸处理后，HepG2会出现脂质沉积、抗氧化应激能力下降、铁超载以及细胞脂质过氧化增加等铁死亡的特征，利拉鲁肽可逆转这一现象。本文从抑制铁死亡的角度，为NAFLD的干预治疗提供了一个新方法。

高脂可促进HepG2细胞中E2F1的表达，可诱导HepG2肝癌细胞发生EMT并增强细胞的侵袭迁移能力。本研究结果提示在临床上应积极指导患者及时降低血脂，避免发展为MAFLD或肝病恶化，减轻病情。

本文采用0.32 mmol/L棕榈酸（KC004，西安鲲创科技）处理的LO2细胞24h，处理后脂质含量增加，细胞活力降低，肝细胞损伤指标ALT、AST酶活性升高，炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达增加，同时lncRNA NEAT1表达上调，成功诱导LO2细胞损伤与炎症反应、并建立MAFLD体外细胞模型

本文采用0.5 mM油酸钠（KC005，西安鲲创科技）处理LO2细胞24h，成功建立脂肪肝细胞模型，结合在体实验，共同揭示了KLF4在二甲双胍改善肝细胞脂肪变性中发挥作用的新机制，为研制治疗 NAFLD 的药物奠定了理论基础。进一步的研究工作，推荐油酸钠、棕榈酸钠（KC006）联合建立HepG2、LO2脂肪肝细胞模型。

将H9C2细胞分为对照组(正常培养)、溶剂组(高脂溶剂+ 0.1% 二甲基亚砜)、高脂高糖组(0.1mmol•L-1 的棕榈酸和50 mmol•L-1的葡萄糖)、低剂量组(高脂高糖诱导+ 5μg•L-1的阿昔莫司)、中剂量组(高脂高糖诱导+ 10 μg•L-1的阿昔莫司)、高剂量组(高脂高糖诱导+ 25 μg•L-1的阿昔莫司)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况;用流式细胞术和TUNEL法检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞蛋白表达水平;并检测各组细胞氧化应激相关指标水平。