使用高脂细胞添加剂（油酸钠/棕榈酸钠）诱导L02肝细胞体外高脂模型经验分享
文献中采用了经典诱导高脂细胞模型的方法，通过使用油酸钠与棕榈酸钠（OA/PA）进行联合给药36h成功诱导了高脂细胞模型，随后给药处理24h，以评估研究药物的药效。具了解，作者前期对OA/PA的诱导时间进行了摸索，分别在24h、36h以及48h三个时间下来诱导高脂细胞，最后认为36小时可以较好的诱导细胞脂滴蓄积。同时，由于细胞处理时间较长，作者在细胞生长至60%的汇合度就开始处理，不会导致后续细胞生长太过于密集，不便于油红O染色的观察。
越来越多研究表明，血脂异常可加速脑血管疾病引起的认知功能损害，主要与TC、TG水平升高密切相关。血浆TC升高可通过多种途径加速血管性痴呆的认知损害，包括慢性炎症、氧化应激、内质网应激和线粒体功能障碍等。本研究发现了双侧颈总动脉结扎模型下，大鼠血脂异常升高，补气活血通脑方治疗后可改善该现象，表明该方可能具有调节脂代谢紊乱的作用。为了明确补气活血通脑方具有调节脂代谢的作用，作者增加了高脂细胞模型做进一步验证。
该研究成果发表在phytomedicine（IF=6.7）2024上的文章（Buqi Huoxue Tongnao prescription protects against chronic cerebral hypoperfusion via regulating PI3K/AKT and LXRα/CYP7A1 signaling pathways），作者使用了油酸钠/棕榈酸钠（OA/PA）诱导L02高脂细胞模型。Palmitic acid (PA), oleic acid (OA),and solvent (vehicle) were purchased from Kunchuang Biotechnology (Xi'an, Shanxi,China).
具体操作如下：
作者采用500µM/250µM的油酸钠/棕榈酸钠处理L02细胞，维持36h，采用油红O染色后进行拍照，其中位于细胞浆中的油红O染色阳性、圆形透亮沉积物即为脂滴，可见油酸钠/棕榈酸钠促进肝细胞脂质蓄积（图1）。同时，作者检测了油酸钠/棕榈酸钠处理下L02高脂细胞Lxrα/Cyp7a1的mRNA表达水平，可见OA/PA诱导降低了Lxrα/Cyp7a1的mRNA表达，抑制了胆固醇的胆汁酸代谢途径。
在OA/PA处理36h后，作者进一步采用不同浓度的中药提取液处理细胞，维持24h后检测了相关指标。
图1. BQHXTN通过促进OA/PA刺激的L02细胞中LXRα和CYP7A1转录减少细胞内脂质积聚。(A)实验设计示意图。(B) BQHXTN(0.125、0.25、0.5、1.0和5.0 mg/mL)处理BV2细胞24 h的活力。(C) 油红O染色相对阳性面积。(D) BQHXTB处理L02细胞ORO染色的代表性图像。比例尺，50 μm。(E、F) Lxrα和Cyp7a1 mRNA相对表达水平。
总结与分享：
文献中采用了经典诱导高脂细胞模型的方法，通过使用油酸钠与棕榈酸钠（OA/PA）进行联合给药36h成功诱导了高脂细胞模型，随后给药处理24h，以评估研究药物的药效。具了解，作者前期对OA/PA的诱导时间进行了摸索，分别在24h、36h以及48h三个时间下来诱导高脂细胞，最后认为36小时可以较好的诱导细胞脂滴蓄积。同时，由于细胞处理时间较长，作者在细胞生长至60%的汇合度就开始处理，不会导致后续细胞生长太过于密集，不便于油红O染色的观察。
