实验用高糖高脂细胞添加剂试剂盒

产品简介：

1. 实验用高糖高脂细胞添加剂的有效成分是棕榈酸钠（Sodium palmitate，10mmol/L）和葡萄糖（Glucose，1mol/L）。
2. 本产品包含高脂溶剂和高糖溶剂对照，同时用于实验可排除胶体和晶体渗透压的影响。
3. 本产品所用溶剂不含NaOH或有机溶剂，对细胞无毒性。
4. 本产品适用于所有类型的细胞，可用于诱发细胞脂毒性、诱导内质网应激、氧化应激、线粒体损伤、细胞凋亡等，见效果图1和图2及参考文献。

图1. 高糖高脂细胞添加剂剂量依赖性诱导心肌细胞凋亡。分别给予H9C2心肌细胞30mmol/L葡萄糖和100、200、300、400µmol/L梯度浓度的棕榈酸钠（High lipid）、溶剂对照（Control）或空白对照（Blank），24小时后，进行Annexin V-FITC（横坐标）、碘化丙啶（Propidium iodide, PI，纵坐标）双染，采用流式细胞仪检测细胞凋亡（Annexin V-FITC阳性、PI阴性，右下象限黑色框内），图A~图G是流式细胞检测结果，图H是细胞凋亡率的统计结果。

图2. 高糖高脂细胞添加剂剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡。分别给予小鼠主动脉内皮细胞30mmol/L葡萄糖和100、200、300、400µmol/L梯度浓度的棕榈酸钠（High lipid）、溶剂对照（Control）或空白对照（Blank），48小时后，采用Western blotting法检测Cleaved caspase-3的蛋白水平。图A是Western blotting检测结果，β-actin是参照蛋白，图B是统计结果。

包装清单：

保存条件：所有试剂-20ºC，1年有效；2-8ºC保存，3月有效。

注意事项：

1. 本产品中棕榈酸钠及溶剂对照均为淡黄色清亮液体，如出现浑浊，不建议继续使用。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1. 针对不同细胞种类及实验目的，棕榈酸钠所用浓度不同，一般与培养基总体积按1:100-1:20稀释，终浓度为100-500umol/L。葡萄糖终浓度一般为25-30mmol/L，但需考虑培养基中现有葡萄糖的浓度。
2. 对于首次使用本产品，建议采用浓度梯度处理细胞，摸索针对特定细胞、达到特定效果的适宜浓度。处理时间上可通过镜下观察细胞状态初步判断，一般20-48小时为宜。
3. 本产品经0.22μm滤器过滤除菌，待细胞生长至80-100%汇合度时，换成新鲜含血清（一般10%）培养基，按适当浓度滴加棕榈酸钠和葡萄糖溶液，对照组加入等量高脂和高糖对照，轻柔混匀后将细胞放入细胞孵箱中继续培养。
4. 如需检测细胞活力（CCK-8和MTT），高脂试剂和溶剂对照处理后，加入CCK-8和MTT前，需用PBS清洗2次，以去除溶剂对照和高脂试剂对吸光度的影响。

参考文献：

1. Ji L, Liu F, Jing Z, et al. MICU1 Alleviates Diabetic Cardiomyopathy Through Mitochondrial Ca²⁺-Dependent Antioxidant Response. Diabetes. 2017 Jun;66(6):1586-1600.
2. Yan W, Zhang H, Liu P, et al. Impaired mitochondrial biogenesis due to dysfunctional adiponectin-AMPK-PGC-1α signaling contributing to increased vulnerability in diabetic heart. Basic Res Cardiol. 2013 May;108(3):329.